Novas técnicas genómicas – Revisão do estado da arte 133 Contudo, mesmo assim, teria sido útil incluir algum tipo de grafismo mais “amigável” (e.g. imagens, esquemas, infografias) para acompanhar o texto. Ademais, e tratando-se de uma temática em permanente evolução (à semelhança das novas tecnologias de informação) poderia ser pertinente atualizar periodicamente o documento. Isso permitiria a inclusão de novas técnicas ou novos conhecimentos sobre as técnicas existentes, garantindo que o documento permaneça relevante e abrangente ao longo do tempo. Além disso, a divulgação de exemplos de utilização das NTG na agricultura por tipo de técnica, por setor e por país também poderia ser interessante. Anexo Principais diferenças Novas Técnicas Genómicas (NGT/NTG) Técnicas Genómicas Estabelecidas (EGT/TGE) Alterações aleatórias vs. Alterações específicas do local As NGT permitem, em princípio, efetuar alterações no genoma num ou mais locais precisos. Estas localizações podem ser cuidadosamente escolhidas como sequência(s) alvo no genoma da(s) célula(s) específica(s) utilizada(s) como objeto da experiência NGT, com base no conhecimento correto da sequência genómica desse organismo específico. Podem também ser utilizadas em combinação com uma sequência dadora para inserir cis-, intra-, ou transgenes numa localização definida no genoma. As EGT baseiam-se frequentemente em alterações aleatórias difíceis de controlar e requerem investimentos significativos em tempo e recursos para a realização de testes. Resultados inesperados vs. Resultados previsíveis As NGT geralmente permitem edições mais precisas e direcionadas no genoma, reduzindo a probabilidade de inserções aleatórias de transgenes e seus efeitos indesejados. O resultado e o efeito do cruzamento interespécies ou intergénios é largamente imprevisível. Também nas experiências de transformação podem ocorrer efeitos indesejados devido à inseção dos transgenes em sequências de genes endógenos. NGT visam sequências específicas do genoma Alvo: são frequentemente sequências em que o efeito da alteração é conhecido de outros organismos. Resultado: é mais previsível em qualquer caso para características monogénicas. Tempo e custos: é geralmente muito mais curto que nas EGT, tais como os custos. Ferramentas: há ferramentas bioinformáticas para evitar ou limitar os riscos de uma experiência NGT afetar sequências fora do alvo. Alvo: podem ser mais amplos e menos específicos. Resultado: as EGT têm geralmente uma abordagem menos precisa e podem afetar uma gama mais ampla de genes de maneira imprevisível. Tempo e custos: mais longo e com mais custos. Os diferentes conjuntos de genes para a realização de alterações genómicas Não são inseridas novas sequências exógenas no genoma de um organismo através de NGT e todas as alterações de sequência são derivadas de sequências endógenas ou de inserções ou deleções aleatórias geradas pelos sistemas de reparação endógeno. A transegénese como EGT pode ser utilizada para exprimir sequências derivadas de espécies não relacionadas. Contudo, a mutagénese tradicional, a cis/intragénese e a indução de autopoliploidia limitam-se ao património genético endógeno existente para induzir alterações. Os diferentes tipos de alterações genómicas Podem ser utilizadas para efetuar pequenas ou grandes supressões de sequências, inserções curtas ou substituições de pares de bases. Muitas das alterações são limitadas em tamanho ao nível de um único nucleótido ou a um número de alterações de pares de bases consecutivas ou dispersas. As alterações induzidas por estas técnicas de transformação genética consistem, em grande medida, na inserção de novas sequências. Singleplex vs. Multiplex Várias NGT, como a CRISPR-Cas, podem ser utilizadas sob forma de abordagens multiplex, introduzindo alterações em diferentes locais do genoma em simultâneo. O número de alterações induzidas é inferior. A mutagénse tradicional e a indução de poliploidia geram alterações múltiplas no genoma. O número de alterações induzidas é superior. Detetabilidade A inserção de ADN heterólogo num local específico da NGT pode ser detetada e quantificada pela mesma abordagem e tecnologia. A deteção e quantificação da inserção de ADN heterólogo num local específico pode ser mais desafiadora em comparação com as NGT, devido à natureza menos precisa das técnicas.
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